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大腸桿菌轉(zhuǎn)化時(shí)免熱激及孵育的方法

中山大學(xué)的徐曉鵬博士向大家介紹了一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)免熱激及孵育的方法。背景：目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟，需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在冰上撫育半小時(shí)，然后42度熱激90秒，加液體培養(yǎng)基緩搖1個(gè)小時(shí)左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時(shí)間要求嚴(yán)格，熱激后大量菌細(xì)胞死亡，還要經(jīng)過(guò)液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。方法改進(jìn)：我們可以在做質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在冰上撫育的同時(shí)，將要涂的平板放在37度培養(yǎng)箱里，當(dāng)撫育結(jié)束后，立即涂到已經(jīng)加熱到37度的平板上，利用培養(yǎng)板的熱度代替熱激，平板可以直接放回...

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蛋白質(zhì)（酶）的提取

大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機(jī)溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。1.有機(jī)溶劑提取法一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶，不溶于水、稀鹽溶液、稀酸或稀堿中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機(jī)溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強(qiáng)的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必須在低溫下操作。丁醇提取法對(duì)提取一些與脂質(zhì)結(jié)合緊密的蛋白質(zhì)和酶特別*，一是因?yàn)槎〈加H脂性強(qiáng)，特別是溶解磷脂的能力強(qiáng)；二是...

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大鼠I型膠原（collagen I）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書

檢測(cè)范圍：96T20ug/L-800ug/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原（collagenI）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠I型膠原（collagenI）水平。用純化的大鼠I型膠原（collagenI）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原（collagenI），再與HRP標(biāo)記的I型膠原（collagenI）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP...

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大腸癌干細(xì)胞

來(lái)自香港大學(xué)醫(yī)學(xué)院等處的研究人員發(fā)現(xiàn)大腸癌CD26+癌干細(xì)胞是導(dǎo)致癌轉(zhuǎn)移的原因，可作為預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)或腸外轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，并有助研發(fā)標(biāo)靶治療藥物，提升大腸癌病人的存活率。這一研究成果公布在CellStemCell雜志上。大腸癌是香港第二號(hào)癌癥“殺手”，每年有逾4000宗新癥，約半數(shù)患者接受傳統(tǒng)切除手術(shù)后癌細(xì)胞會(huì)轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散，而一旦出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散，5年存活率只有8%。領(lǐng)導(dǎo)這一研究的是香港大學(xué)李嘉誠(chéng)醫(yī)學(xué)院腸胃及肝臟科前教授王振宇，王振宇教授的團(tuán)隊(duì)與解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)合作，曾發(fā)現(xiàn)阿司匹林及抗胃...

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沙門氏菌治療腫瘤可誘發(fā)殺滅癌細(xì)胞免疫反應(yīng)

一項(xiàng)在小鼠中的新的研究報(bào)告說(shuō)，用沙門氏菌治療腫瘤可誘發(fā)一種能夠有效殺滅癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)。在本研究中，該團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，來(lái)自小鼠和人的感染了沙門氏菌的黑色素瘤細(xì)胞可增加在這些細(xì)胞中的連接蛋白43的含量。其結(jié)果是新的間隙連接形成了，它使得染有黃色熒光的小分子能夠在腫瘤細(xì)胞之間通行或從腫瘤細(xì)胞進(jìn)入免疫細(xì)胞。但是研究人員希望查明，這種可使腫瘤肽進(jìn)入免疫細(xì)胞的間隙連接也會(huì)在活體動(dòng)物中出現(xiàn)。因此，他們對(duì)患癌的小鼠進(jìn)行了沙門氏菌的治療并觀察到，正如在實(shí)驗(yàn)室的分離細(xì)胞中所觀察到的，這些腫瘤肽可通過(guò)...

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成功將內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)成iPS細(xì)胞

中國(guó)臺(tái)灣一家科研機(jī)構(gòu)研究團(tuán)隊(duì)利用胎兒臍帶血管里的人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，并加入2個(gè)非致癌性基因，成功將內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變成干細(xì)胞，且免除有致癌風(fēng)險(xiǎn)基因，研究成果和干細(xì)胞研究同步。中國(guó)臺(tái)灣衛(wèi)生研究院細(xì)胞及系統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究所副研究員顏伶汝今天表示，2006年和2007年日本和美國(guó)分別宣布發(fā)現(xiàn)將普通皮膚細(xì)胞轉(zhuǎn)化為干細(xì)胞的方法，這種干細(xì)胞功能與胚胎干細(xì)胞相差不多，因此被稱為干細(xì)胞，簡(jiǎn)稱iPS細(xì)胞。為了避免加入致癌性基因、又可以成功發(fā)展出干細(xì)胞，顏伶汝說(shuō)，“國(guó)衛(wèi)院”團(tuán)隊(duì)利用胎兒臍帶血管里的人體臍靜脈...

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脊髓損傷小鼠成功再生神經(jīng)通路

在對(duì)小鼠的研究中，美國(guó)加州大學(xué)歐文分校、加州大學(xué)圣地亞哥分校和哈佛大學(xué)聯(lián)合組成的研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)逆轉(zhuǎn)一個(gè)分子通道中的生物鐘而獲得了這項(xiàng)突破，該分子通道對(duì)于皮質(zhì)脊髓束神經(jīng)通路而言非常關(guān)鍵。研究人員誘導(dǎo)脊髓受損的小鼠再生出可控制自主行動(dòng)的神經(jīng)通路，這一成果有望開發(fā)出治療癱瘓和其他運(yùn)動(dòng)功能性障礙的新方法。“在此之前，如此強(qiáng)大的神經(jīng)再生不可能在脊髓中出現(xiàn)，”加州大學(xué)歐文分校里夫-歐文研究中心負(fù)責(zé)人、解剖學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)教授斯圖爾特說(shuō)，“癱瘓和因脊髓損傷導(dǎo)致的功能喪失一直被認(rèn)為是無(wú)藥可醫(yī)的，...

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蛋白質(zhì)泛素化機(jī)制研究新進(jìn)展

通過(guò)三型分泌系統(tǒng)分泌效應(yīng)分子進(jìn)入真核細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而阻斷或調(diào)節(jié)宿主關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是許多病原菌普遍采用的致病機(jī)制。尋找效應(yīng)分子在宿主細(xì)胞中的靶蛋白并闡明其作用于靶蛋白及相關(guān)信號(hào)通路的生物化學(xué)機(jī)理對(duì)我們了解病原菌致病機(jī)理和建立有效防治手段有著重要的意義。同時(shí)，這也可能促進(jìn)我們對(duì)真核細(xì)胞本身信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的進(jìn)一步理解。2010年8月5日，NIBS邵峰博士實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了病原細(xì)菌效應(yīng)蛋白通過(guò)直接共價(jià)修飾并失活宿主細(xì)胞中的泛素和泛素類蛋白從而導(dǎo)致宿主泛素信號(hào)通路發(fā)生功能紊亂的新的致病機(jī)制。該研...

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