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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法糖代謝系列BC4440-50T/48S半纖維素含量檢測(cè)試劑盒 糖代謝
產(chǎn)品型號(hào)：BC4440-50T/48S
更新時(shí)間：2024-04-16
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1479
010-50973130
產(chǎn)品分類
半纖維素含量檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號(hào): BC4440
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30 mL×1瓶 | 常溫保存 |
提取液二 | 液體30 mL×1瓶 | 常溫保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二 | 2-8℃保存 | |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：80%乙醇自備；
2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg D-木糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解配制成10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。2-8℃保存4周。
產(chǎn)品說明：
半纖維素是指在植物細(xì)胞壁中與纖維素共生、可溶于堿溶液，遇酸后遠(yuǎn)較纖維素易于水解的那部分植物多糖，廣泛存在于植物中，其分布因植物種屬、成熟程度、早晚材、細(xì)胞類型及其形態(tài)學(xué)部位的不同而有很大差異。一種植物往往含有幾種由兩或三種糖基構(gòu)成的半纖維素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)各不相同。半纖維素是一種新型的可利用能源。
半纖維素在一定條件下水解為還原性糖類，還原糖在堿性條件下與3，5-二硝基水楊酸（DNS）加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，DNS則被還原為棕紅色3-氨基-5-硝基水楊酸，在540nm處具有特征吸收峰，通過吸光值的變化即可定量檢測(cè)半纖維素的含量
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.2311 mg/mL
線性范圍：0.4-2.5 mg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
天平、可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、30~50目篩、蒸餾水、EP管。
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
樣本自然風(fēng)干或用烘箱烘干至恒重，研缽充分研磨后，過30~50目篩。
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋至2.5、2、1、0.8、0.6、0.4 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。
3、 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：
序號(hào) | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 10 | 50 | 150 | 2.5 |
2 | 10 | 40 | 160 | 2 |
3 | 10 | 50 | 450 | 1 |
4 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
5 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
6 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需125µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4、 操作表（在1.5 mL EP管中操作）：
試劑名稱 | 空白管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣本（g） | 0.05 | ||
試劑一（μL） | 1000 | ||
漩渦混勻，90℃水浴10 min，25℃，8000 g離心10 min，棄上清留沉淀 | |||
蒸餾水（μL） | 1000 | ||
漩渦混勻，25℃，8000 g離心10 min，棄上清，此步驟重復(fù)三次，取沉淀，烘干至恒重 | |||
提取液一（μL） | 500 | 500 | |
90℃水浴1 h，自然冷卻至室溫 | |||
提取液二（μL） | 500 | 500 | |
漩渦混勻，25℃，8000 g離心10 min，取上清待測(cè) | |||
上清液（μL） | 125 | 125 | |
標(biāo)準(zhǔn)液（μL） | 125 | ||
試劑二（μL） | 125 | 125 | 125 |
蒸餾水（μL） | 750 | 750 | 750 |
漩渦混勻，90℃水浴5 min，自然冷卻至室溫 | |||
取1 mL反應(yīng)液于1 mL玻璃比色皿中，在540 nm下測(cè)定吸光值A，分別記為A空白、A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白，ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測(cè)定1-2次。 | |||
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（y，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（x，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（x，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（y，mg/mL）。
2、半纖維素含量的計(jì)算：
半纖維素含量（mg/g 干重）= y×V樣總÷W×F= y÷W×F
V樣總：加入提取液體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；F：稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng)：
1、如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。
2、建議將加入提取液二離心后的上清液稀釋10~20倍后檢測(cè)。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC3330/BC3335 糖原合成酶活（GCS）性檢測(cè)試劑盒
BC3360/BC3365 UDPG焦磷酸化酶（UGP）活性檢測(cè)試劑盒
BC4290/BC4295 N-乙酰基-β-葡萄糖苷酶（NAG）活性檢測(cè)試劑盒
半纖維素含量檢測(cè)試劑盒 糖代謝 半纖維素含量檢測(cè)試劑盒 糖代謝
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