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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC5630-50T/48S
更新時間：2024-04-23
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1379
010-50973130
產品分類
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精*酸（Arg）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC5630
規格：50T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
規格 | 保存條件 | |
提取液一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體9 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入1.5mL無水乙醇，充分溶解。-20℃可以保存4周。
2、 工作液配制：根據樣本量按照試劑一：試劑二=50μL：450μL（500μL，2T）的比例配制，現配現用。
3、 標準品：臨用前加入0.918 mL蒸餾水，充分溶解，配制成62.5 μmol/mL 精*酸標準溶液。臨用前取10μL的62.5 μmol/mL 精*酸標準溶液于EP管中，加入790 μL蒸餾水充分溶解，配制成0.78125 μmol/mL的精*酸標準溶液。
產品說明：
精*酸(Arginine)是人體和動物體內的半必需氨基酸，在機體中參與蛋白質的合成代謝、以及多胺和NO的合成，起著重要的生理作用。精*酸有降低血壓的作用，在體內精*酸能夠分解成為一氧化氮，一氧化氮能松弛血管壁平滑肌，調節血管彈性，對血管內膜有修復作用。精*酸能夠刺激并誘導腎上腺激素分泌，從而降低血糖，減少身體中脂肪酸的生產，能使高血糖患者的血糖降至正常水平。
精*酸在堿性介質中與甲萘酚和次氯酸鈉生成紅色生成物，其在525nm處有特征吸收峰，以此計算精*酸含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、渦旋混勻儀、分析天平、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
組織：按照質量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
細胞：按照細胞數量（106個）：提取液一體積（mL）為5~1：1的比例（建議5百萬細胞加入1mL提取液一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
血清（漿）等液體：取100μL液體加入1mL提取液一，4℃ 12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
注：提取液二需緩慢加入，加入后會產生大量氣泡，建議使用2mL EP管進行操作。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計預熱30min以上，調節波長至525nm，蒸餾水調零。
2、 在1.5mLEP管中按下表步驟加樣：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 250 | - | - |
標準品 | - | 250 | - |
蒸餾水 | - | - | 250 |
工作液 | 250 | 250 | 250 |
避光、冰浴20min | |||
試劑三 | 250 | 250 | 250 |
充分震蕩30s | |||
試劑四 | 250 | 250 | 250 |
充分混勻后，冰浴反應2min，于比色皿中測定在525nm處的吸光度，記作A測定，A標準，A空白。?A測定=A測定-A空白，?A標準=A標準-A空白。（標準管和空白管只需做1-2次） | |||
三、精*酸（Arg）含量計算
(1) 按樣本蛋白濃度計算
Arg含量（μmol/mg prot）=C標準×?A測定÷?A標準×V樣÷（Cpr×V樣）×F = 0.781×?A測定÷?A標準÷Cpr×F
(2) 按樣本質量計算
Arg含量（μmol/g 質量）= C標準×?A測定÷?A標準×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）×F
= 0.928×?A測定÷?A標準÷W×F
(3) 按細菌或細胞數量計算
Arg含量（μmol/106 cell）= C標準×?A測定÷?A標準×（V上清+V提取液二）÷（N÷V上清÷V提取液一）×F
= 0.928×?A測定÷?A標準÷N×F
(4) 按液體體積計算
Arg含量（μmol/mL）= C標準×?A測定÷?A標準×（V上清+V提取液二）÷（V液體×V上清÷（V液體+V提取液一））×F
= 10.205×?A測定÷?A標準×F
C標準：精*酸標準溶液濃度，0.78125 μmol/mL；V樣：反應體系中加入的樣本體積，0.25mL；V上清：提取時上清的體積，0.8mL；V提取液二：加入提取液二的體積，0.15mL；V提取液一：加入提取液一的體積，1mL；V液體：液體樣本體積，0.1mL；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細胞或細菌數量，以106計；F：樣本稀釋倍數。
注意事項：
1. 如果?A測定大于0.8，可以用蒸餾水對樣本進行稀釋；如果?A測定小于0.01，可以加大樣本量。最終計算時同步修改計算公式。
2. 提取液一中含有蛋白質沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取組織。
實驗實例：
1、 稱取0.1162g小鼠腎臟組織，加入提取液進行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.582-0.227=0.355，?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5，帶入公式計算：
Arg含量（μmol/g 質量）=0.928×?A測定÷?A標準÷W=5.670 μmol/g 質量。
2、 稱取0.1186g花生組織，加入提取液進行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.661-0.227=0.434，?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5，帶入公式計算：
Arg含量（μmol/g 質量）=0.928×?A測定÷?A標準÷W=6.792 μmol/g 質量。
3、 取人血清按按前處理和實驗步驟進行實驗，用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.314-0.227=0.087，?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5，帶入公式計算：
Arg含量（μmol/mL）=10.205×?A測定÷?A標準×F =1.776 μmol/mL。
參考文獻：
[1] Francis P S, Barnett N W, Foitzik R C, et al. Chemiluminescence from the Sakaguchi reaction [J]. Analytical Biochemistry, 2004, 329(2):340-341.
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