土壤過氧化氫酶(S-CAT)活性檢測試劑盒說明書 詳見附件
紫外分光光度法
貨號:BC0100
規格:50T/24S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體0.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑一:液體置于試劑瓶內EP管中,使用前需將EP管先離心。臨用前取0.05 mL試劑一加入9.95mL蒸餾水稀釋待用或者按比例配制。用不完的試劑2-8℃保存1周。
試劑二:臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑2-8℃保存4周。
產品說明:
S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類,在H2O2清除系統中具有重要作用。
H2O2在240nm下有特征吸收峰,通過測定與土壤反應后溶液在此波長下吸光度的變化,即可反應S-CAT活性的高低。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、蒸餾水、研缽、30~50目篩和蒸餾水。
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干,過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min以上,調節波長至240nm,蒸餾水調零。
加樣表(1.5ml EP管):
| 試劑名稱 | 測定管 | 無基質管 | 無土管 |
| 風干土樣(g) | 0.1 | 0.1 |
|
| 試劑一(μL) | 1000 |
| 1000 |
| 蒸餾水(μL) |
| 1000 |
|
| 25℃振蕩培養20min |
| 試劑二(μL) | 25 | 25 | 25 |
| 混勻8000g,25℃離心5min,取全部上清 |
混勻,240nm處記錄各管吸光值A。(每個測定管要設一個無基質管,無土管只要做1-2管)
三、S-CAT活力的計算
單位的定義:每天每g風干土樣催化1mmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
計算公式:S-CAT(U/g 土樣)=[(A無土管-A測定管+A無基質管)×V反總÷(ε×d)×103]÷W÷T
=18.9×(A無土管-A測定管+A無基質管)
V反總:反應體系總體積,1.145×10-3L;ε:過氧化氫摩爾消光系數,43.6 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm; T:反應時間,20min=1/72d;W:樣本質量,0.1g。
注意事項:
如果吸取的上清仍有部分渾濁,可以在加入試劑三后統一再次進行離心。
相關發表文獻:
[1] Hou Q, Wang W, Yang Y, et al. Rhizosphere microbial diversity and community dynamics during potato cult ivation[J]. European Journal of Soil Biology, 2020, 98: 103176.
參考文獻:
[1] 楊蘭芳, 曾巧, 李海波, et al. 紫外分光光度法測定土壤過氧化氫酶活性[J]. 土壤通報, 2011, 42(1):207-210.
[2] Johansson L H, Borg L A H. A spectrophotometric method for determination of catalase activity in small tissue samples[J]. Analytical biochemistry, 1988, 174(1): 331-336.
相關系列產品:
BC0280/BC0285 土壤堿性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性檢測試劑盒
BC0110/BC0115 土壤多酚氧化酶(S-PPO)活性檢測試劑盒
BC0120/BC0125 土壤脲酶(S-UE)活性檢測試劑盒
BC0140/BC0145 土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性檢測試劑盒
土壤過氧化氫酶檢測試劑盒(S-CAT) 土壤過氧化氫酶檢測試劑盒(S-CAT)